通常可以通过最佳使用封闭剂，稀释剂和对照剂来改善使用免疫技术的实验方案。阅读更多内容，以了解如何选择合适的稀释剂和封闭步骤来防止有害背景，以及实验控制方法如何帮助识别偏离目标的信号源。
使用对照，稀释剂和封闭剂优化您的实验方案。
在开发免疫技术时，考虑结果分析很重要。添加正确的封闭剂和实验对照可以改善测定性能和解释。在生成要发布的数据时，包括阳性和阴性对照很重要。
使用本指南可了解有关在一系列免疫技术中选择适当的对照，稀释剂和封闭剂的更多信息，
•减少背景。
•对脱靶信号进行故障排除。
•促进分析。
正常血清
正常血清得自未免疫的动物，因此未检测到任何特异性抗原。强烈建议在PBS（或类似缓冲液）中稀释至5％（v / v）的正常血清作为封闭剂，以减少非特异性，保守序列和/或Fc受体结合的背景。用稀释的正常血清从与标记抗体相同的宿主中获得最佳结果，在添加一级抗体之前用作单独的孵育步骤。
来自正常血清的ChromPure™纯化蛋白
ChromPure™蛋白主要用作一抗或二抗的实验对照。它们也可以用作免疫印迹，IHC和IF的封闭剂。ChromPure™蛋白来源于未免疫动物的血清，不能识别任何已知抗原。它们使用多种色谱技术进行制备，所产生的材料在浓度高达20 mg / ml时不会观察到污染分子，因此非常适合用作最灵敏的测定的实验对照。ChromPure™蛋白可用于多种许多物种的格式，包括完整的免疫球蛋白，F（ab’）2和Fab片段。
也可以使用人IgM，血清IgA和其他蛋白质。Jackson ImmunoResearch为该产品系列提供了广泛的偶联物，包括多种荧光染料和报道酶，可用于分离非特异性相互作用产生的信号。
单价Fab片段
亲和纯化的抗体Fab片段可用于阻断内源性免疫球蛋白以减少背景染色并使来自同一宿主物种的一抗标记双倍。以下示例显示了在小鼠组织上使用小鼠一抗时，Fab片段如何用于阻断内源性免疫球蛋白。
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不含IgG，不含蛋白酶的牛血清白蛋白
牛血清白蛋白（BSA）被广泛用作稀释抗体的载体蛋白，并在免疫测定和免疫检测方案中用作一般的蛋白质阻断剂。如果BSA是测定所需的稀释剂或封闭剂，那么使用适合此目的的BSA至关重要。
大多数BSA产品，包括市售的不含可检测IgG的产品，都被低含量的牛IgG污染。
牛IgG与山羊，绵羊和马IgG共有许多表位，并且可以成为针对那些物种的二抗的靶标（牛抗山羊IgG除外）。这也可能与与牛IgG交叉反应的其他抗体发生。相互作用可能导致抗体活性降低和/或背景增加。背景可以源自粘性的，可溶的免疫复合物或源自污染牛的IgG的非特异性结合，所述牛IgG吸引了交叉反应的标记的二抗。
Jackson ImmunoResearch牛血清白蛋白不含IgG和蛋白酶。它不含污染性IgG，可减轻与许多BSA商业高纯度制剂相关的常见免疫测定问题。不含IgG的BSA以纯蛋白质形式提供，以10 g，50 g和250 g的包装大小从去离子水中冷冻干燥。
参考文献:
Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland Press. London.
Kalyuzhny A (2016) Immunohistochemistry – Essential Elements and Beyond. Springer International Publishing Switzerland.
Mann, M. & Jensen, O.N. (2003) Proteomic analysis of post-translational modifications. Nat. Biotechnol. 21, 255-261.
（文章来源：Jackson ImmunoResearch）