结肠癌造模诱导剂(Wako/Sigma)— 偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)

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  • 2019年6月29日
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基本描述:

偶氮甲烷(氧化偶氮甲烷),英文Azoxymethane,缩写AOM,可有效诱导大小鼠结肠癌,广泛用作一种基质引起实验动物发生结肠肿瘤,从而研究癌症预防物和癌症形成机制。另外,越来越多结肠癌病例的发生,使得癌症预防物的研究也越来越流行。按照每周一次皮下注射AOM(15mg/kg体重)进入大鼠体内,连续3周给药。数周后能观察到癌前期病变。

作用机制:偶氮甲烷(AOM)能诱导DNA产生O6-甲基鸟嘌加合物,导致G→A转化。

主要应用:偶氮甲烷(AOM)常联合DSS(Mw:36000-50000 Da)注射动物,建立结肠癌模型,用来研究癌症发展机制和化学预防。

 

基本特征:

1)  CAS NO. 25843-45-2

2)  线性分子式:CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3)  分子量:74.08

4)  纯度:≥98%

5)  结构式:

 

结肠癌(Colon cancer)模型建立案例:

1、  文献来源:Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1    DSS溶液制备(2% DSS溶液):溶解10gDSS于500ml无菌的饮用水中,使用前溶液保存在4℃,最好现配现用。

1.2    AOM溶液制备:用无菌水溶解AOM配制10 mg/ml的储存液,分装后放到-20℃保存,避免反复冻融。使用之前,融化分装母液并用无菌生理盐水1:10倍稀释。

1.3    小鼠结肠炎相关的依赖性结直肠癌造模方法

1)  第1天称重和标记小鼠;

2)  按10 mg/kg体重的剂量腹腔注射AOM溶液;

3)  加DSS溶液灌满小鼠笼内的饮水槽,以5ml DSS溶液/小鼠/天加量,对照小鼠加等体积不含DSS的饮用水;

4)  第3天清空笼子内剩余的DSS饮用水,过两天重新装满DSS溶液;

5)  第5天清空笼子内剩余的DSS饮用水,重新装满DSS溶液;

6)  第8天清空笼子内剩余的DSS溶液,换上不含DSS的无菌水持续14天;

7)  第22-26天重复第3)-5)步;

8)  第29天清空笼子内剩余的DSS溶液,换上不含DSS的无菌水持续14天;

9)  第43-47天重复第3)-5)步;

10)第50天清空笼子内剩余的DSS溶液,换上不含DSS的无菌水;

2、文献来源:Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制备(2.5% DSS溶液):称取2.5g DSS溶于100ml无菌水,本溶液置于4℃可稳定保存1周。最好现配现用。

2.2 AOM溶液制备:用无菌水溶解AOM配制10 mg/ml的储存液,分装后放到-20℃保存,避免反复冻融。AOM在水或生理盐水中的稳定性高于PBS缓冲液,且在玻璃管内稳定性好于塑料管。使用之前,融化分装母液并用无菌生理盐水1:10倍稀释。

2.3 小鼠结肠癌造模方法

1)第1天称重,等数分组并标记小鼠;

2)按照10mg/kg体重的浓度计算所需的AOM量,取适量的AOM储存液(10mg/ml)用无菌生理盐水1:10倍稀释。

3)腹腔注射AOM工作液(剂量10mg/kg体重,则10g体重小鼠注射100ul工作液)到实验组小鼠,同时注射等体积的无菌生理盐水到对照组小鼠。

4)自此步之后,按照两种方法继续实验。若建立自发性肿瘤进展模型,见方案A;若建立慢性炎症驱动的肿瘤进展模型,见方案B。

 

方案A,自发性肿瘤进展模型

A1,第8天重复步骤1)-3);

A2,第15天重复步骤1)-3);

A3,第22天重复步骤1)-3);

A4,第29天重复步骤1)-3);

A5,第36天重复步骤1)-3);【到这步每只小鼠都腹腔注射给药6次】

A6,第一次注射后的3个月评估癌前病变,此时不需处死动物。

A7,第一次注射后的6个月评估肿瘤发展。

 

方案B,慢性炎症驱动的肿瘤进展(Chronic inflammation-driven tumor progression)

B1,制备2.5%(wt/v)DSS溶液。此浓度的DSS能让FVB/N小鼠和其他品系产生良好的造模效果。

B2,按3天的用量加DSS溶液灌满小鼠笼内的饮水槽,以5ml DSS溶液/小鼠/天用量,对照小鼠加等体积不含DSS的饮用水;

B3,第4天清空饮水槽内残留DSS溶液,并且重新灌满另2天所需量的新鲜DSS溶液。

B4,第6天清空饮水槽内残留DSS溶液,并且重新灌满另2天所需量的新鲜DSS溶液。

B5,第8天清空饮水槽内残留DSS溶液,并且重新灌满灭菌水。

B6,第22-29日重复步骤B1)-B5)。

B7,第40日评估癌前病变,此时不需处死动物。

B8,第53-60日重复步骤B1)-B5)。

B9,第80日评估肿瘤发展。

2.4 AOM诱导肿瘤图示(图1)

图1.内窥镜肿瘤调研。通过迷你腔镜监测AOM诱导的肿瘤形成情况。a)还能用于纵向研究;b)对于肿瘤负荷分析,每只小鼠的肿瘤大小按照预设的时间点记录并做总和。

 

Azoxymethane(AOM)订购信息:原装正品,欢迎来电咨询,021-54736159,QQ2716000500。

品牌

货号 名称 CAS NO. 规格 目录价(元)
MPbio 0218397125 Azoxymethane 偶氮甲烷 25843-45-2 25mg

3361.3

MPbio 0218397180 Azoxymethane 偶氮甲烷 25843-45-2 100mg

9450

 DSS(Mw:36000-50000 Da)订购信息:现货促销,量大价更优,欢迎来电咨询。

品牌      货号                名称                                 规格          目录价(元)  促销活动  
MPbio 0216011010 DSS(Mw:36000-50000 Da)硫酸葡聚糖钠盐 10g 2178

100g

500g

5折促销,

现货供应

MPbio 0216011050 DSS(Mw:36000-50000 Da)硫酸葡聚糖钠盐 50g 5445
MPbio 0216011080 DSS(Mw:36000-50000 Da)硫酸葡聚糖钠盐 100g 8167.5
MPbio 0216011090 DSS(Mw:36000-50000 Da)硫酸葡聚糖钠盐 500g 33759

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

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